LS1034人結腸腺癌細胞

英文名稱 | LS1034 | 規格 | 1×106cells |
種屬 | 人 | 生長特性 | 貼壁生長 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 | 貨號 | E-XB6381 |
用途 | 僅供科研研究實驗 | 貨期 | 現貨 |

細胞介紹
LS1034 是一種結直腸癌細胞系,于 1989 年從一名 54 歲的高加索男性患者的原發性腫瘤活檢中分離出來,該患者被診斷為 Dukes C 型中度至低分化盲腸癌。
細胞特性
1)來源:盲腸 大腸癌
2)形態:上皮樣,貼壁生長
3)含量:>1×10? 細胞數
4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代。
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備1640培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
注意事項:
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。
使用范圍
本產品僅限于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。


1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否*揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。.觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養基重懸細胞,并接種到新的培養瓶或培養皿中,置于培養箱中進行培養。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后次傳代建議1:2傳代 。
9. 注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。


1)復蘇細胞:將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2-3ml*培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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